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ATCC細(xì)胞的初代培養(yǎng)實(shí)驗說明

發(fā)布時間: 2021-07-13  點(diǎn)擊次數(shù): 1019次
   對于ATCC細(xì)胞的初代培養(yǎng)或原代培養(yǎng),是從供體獲取組織后的第1次培養(yǎng)。其主要的優(yōu)點(diǎn)是組織和細(xì)胞剛剛離體,生物性狀尚未發(fā)生很大的變化,具有二倍體遺傳性狀,在供體來源充分、生物條件穩(wěn)定的情況下(年齡、性別),在一定程度上能反映體內(nèi)狀態(tài)。
  ATCC細(xì)胞進(jìn)行初代培養(yǎng)的實(shí)驗步驟如下:
  1.剪切
  把組織小塊(1cm³)置入小燒杯或青霉素小瓶中,用Hanks液漂液二三次以去掉表面血污,吸凈Hanks液,用眼科剪反復(fù)剪切成1mm³塊為止。
  2.擺布
  用彎頭吸管吸取若干小塊,置入培養(yǎng)瓶中;用吸管彎頭把組織小塊擺布在培養(yǎng)瓶底上,小塊相互距離以0.5cm為宜,每一25ml培養(yǎng)瓶底可擺布20-30塊。
  3.輕輕翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶,令瓶底向上。注意翻瓶時勿令組織小塊流動,塞好瓶塞,置36.5℃溫箱2小時左右(勿超過4小時),使小塊微干涸。
  4.培養(yǎng)
  取出培養(yǎng)瓶并開塞,保持46°斜持培養(yǎng)瓶(瓶底仍向上),向瓶底角部輕輕注入培養(yǎng)液小許,然后緩緩再把培養(yǎng)瓶翻轉(zhuǎn)過來,讓培養(yǎng)液慢慢覆蓋附于瓶底上的ATCC細(xì)胞組織小塊(組織小塊附著尚不牢,注意不要把組織塊沖走);置溫箱中靜止培養(yǎng)。待細(xì)胞從組織塊游出數(shù)量增多后,再補(bǔ)加培養(yǎng)液。

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