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ATCC細胞觀察培養(yǎng)時的主要事項說明

發(fā)布時間: 2022-03-10  點擊次數(shù): 936次
   ATCC細胞轉化試驗有形態(tài)計數(shù)法、MTT法和同位素法三種。MTT法即四甲基偶氮唑鹽微量酶反應比色法,MTT是一種噻唑鹽,化學名3-(4,5-二甲基-2-噻唑)-2,5-二苯基溴化四唑,水溶液為黃橙色。小鼠脾細胞受到ConA作用后發(fā)生增殖活化,其胞內線粒體琥珀酸脫氫酶活性相應升高,MTT作為其底物參與反應,形成藍色的甲臜(Formazan)顆粒沉積于細胞內或細胞周圍,經鹽酸─異丙醇溶解后為藍色溶液,可用酶標測定儀測定細胞培養(yǎng)物的OD值,測定波長570nm,根據(jù)OD值的大小計算反應體系中細胞增殖程度。
  ATCC細胞觀察培養(yǎng)時的主要事項說明:
  1.肉眼觀察細胞培養(yǎng)基顏色,再借助顯微鏡觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數(shù)拍照(建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時的細胞100X,200X各一張),這樣做可方便后期的對比。
  2.用75%的酒精消毒(75%的酒精的水要經過殺菌處理)。
  3.嚴格按照在無菌環(huán)境下操作的原則,打開細胞培養(yǎng)瓶。
  4.將細胞培養(yǎng)瓶內的培養(yǎng)基用吸管*吸出(嚴禁直接傾倒),放入另一無菌容器中(要換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞)。
  5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面,洗3-4次遍,加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓,輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細胞脫落,加入終止液終止。
  6.1000rpm,5min離心,重懸細胞。
  7.換新的細胞培養(yǎng)瓶,37℃,5%CO2培養(yǎng)。

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